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Ti质粒的转化有哪些机理?
杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒,其上有一段T-DNA,农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后,可将T-DNA插入到植物基因组中。因此,农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。
Ti质粒转化植物细胞的过程主要分为以下几个步骤: 根癌农杆菌对植物细胞的识别和附着。 根癌农杆菌对植物信号物质的感受。 根癌农杆菌Ti质粒上的vir基因以及染色体上操纵子的活化。 T-DNA复合体的产生。
除此之外,Ti质粒上还存在Con区(region encoding conjugation)和Ori区(origin of replication)。T-DNA上共有三套基因和左右两个边界,LB和RB是长为25bp的末端反复重复顺序,在切除及整合过程具有重要意义。
将外源基因导入动物细胞常用方法有磷酸钙转染技术,电穿孔转染技术,脂质体载体法,DEAE-葡聚糖转染技术,显微注射法等。
如何配制AS(乙酰丁香酮),书上写的是配成200umol/L。
乙酰丁香酮的配制方法:用于拟南芥花侵染的,配制使用的溶剂为DMSO,母液为100mM,使用浓度请参照相关文献。另外一种是用于愈伤组织的侵染,是用少量甲醇溶解后,再用蒸馏水定容。之后过滤除菌。
聚苯乙烯的经常被用来制作泡沫塑料制品。聚苯乙烯还可以和其他橡胶类型高分子材料共聚生成各种不同力学性能的产品。日常生活中常见的应用有各种一次性塑料餐具,透明CD盒等等。
乙酰丁香酮可以加热灭菌吗?
需要。用于拟南芥花侵染的,配制使用的容积为DMSO,母液为100mM,另外一种是用于愈伤组织的侵染,是用少量甲醇溶解后,再用蒸馏水定容,之后过滤除菌。
乙酰丁香酮是一种酚类化学物,可诱导脓杆菌Vir基因的活化,从而促进外源基因的整合。作用机理是通过诱导农杆菌Vir区基因的活化与表达,促进T-DNA的加工与转移,从而促使农杆菌T-DNA更容易进入植物基因组并与其整合。
⑵ 乙酰丁香酮(acetosyingone, As)的浓度 共培养基中As能起到诱导活化农杆菌vir基因的作用,浓度太低会导致农杆菌病毒蛋白表达量不够,难以完成转化,AS浓度过大可能会导致T-DNA插入的拷贝数目增加。
我们是这样做的,配制AS的时候,DMSO和水的比例是1:1溶解AS,比如你要配20mlAS,那就10mlDMSO完全溶解AS后再加10ml水混匀,4℃保存,通常AS配成1000x的母液,一升培养基加1mlAS,再倒平板。温度越高越能溶解滴呀。
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