本篇文章给大家谈谈乙酰丁香酮的配制,以及乙酰丁香酮配制浓度对应的知识点,希望对各位有所帮助,不要忘了收藏本站喔。
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乙酰丁香酮可以加热灭菌吗?
需要。用于拟南芥花侵染的,配制使用的容积为DMSO,母液为100mM,另外一种是用于愈伤组织的侵染,是用少量甲醇溶解后,再用蒸馏水定容,之后过滤除菌。
乙酰丁香酮是一种酚类化学物,可诱导脓杆菌Vir基因的活化,从而促进外源基因的整合。作用机理是通过诱导农杆菌Vir区基因的活化与表达,促进T-DNA的加工与转移,从而促使农杆菌T-DNA更容易进入植物基因组并与其整合。
⑵ 乙酰丁香酮(acetosyingone, As)的浓度 共培养基中As能起到诱导活化农杆菌vir基因的作用,浓度太低会导致农杆菌病毒蛋白表达量不够,难以完成转化,AS浓度过大可能会导致T-DNA插入的拷贝数目增加。
我们是这样做的,配制AS的时候,DMSO和水的比例是1:1溶解AS,比如你要配20mlAS,那就10mlDMSO完全溶解AS后再加10ml水混匀,4℃保存,通常AS配成1000x的母液,一升培养基加1mlAS,再倒平板。温度越高越能溶解滴呀。
所有的Vir区基因均处于非转录活性状态,这些基因接受As等信号分子后便开始转录活化。
***康宁木霉(T.pseudokoningii)
1、赵培宝等(2010)建立了T.pseudokoningii中农杆菌介导的T-DNA插入突变体系,确定在木霉孢子浓度106cfu/mL,农杆菌A600=0.15~0.20,乙酰丁香酮浓度为0.25M条件下共培养36h的转化效率最高,可达60~120个每106个孢子。
2、Auke等(1991)的研究表明,***康宁木霉(T.pseudokoningii)和长枝木霉(T.longibrachiatum)可以产生梭原素(fusigen)类型的嗜铁素,从而协助木霉从浓度很低的环境中吸收铁。
3、木霉(T.citrinoviride)和红褐肉座菌(H.jecorina)(T.reesei的有性阶段)比该组的其他种类,例如***康宁木霉(T.Pseudokoningii)和T.citrinoviride,纤维素酶产量高;还发现来自热带地区的木霉纤维素酶产量也明显高于来自温带地区的木霉。
4、Trichoderma这个名字现在仅仅用于描述以T. viride为代表的分布广泛的绿色类型。依据微观特征,Rifai(1969)给予Trichoderma属的界定,现在已经被普遍接受。
重悬液里加多少as
按1%量接种到新鲜的YEB或MS培养液(pH 4-8)中,需要时也可添加AS(100umol/L)。继续培养至OD值为0.2左右时,可直接用于接种。或当OD值为0.6-0.8时,将菌液转入无菌离心管中,4000rpm离心心5分钟。
连接产物:3000 rpm离心5 min,弃上清,留取少量LB(50 μL左右),重悬沉淀,全部均匀涂布于LB培养板(需含相应抗生素)上,37℃ 倒置培养 16 18h;质粒:直接取20 50 μL涂于LB培养板上培养即可。
PEG浓度为0.15的胶体金重悬液,可以有效地提高纳米药物的稳定性,抑制其生长和聚集,从而保证药物在体内的循环时间和分布。
取上述菌液在室温下,4000rpm,10min,弃上清,加入MS液体培养基(含AS 100uM)重悬菌体,在与上相同的条件下培养2hr,使菌液的OD600=0.5左右,此时可用来转化愈伤组织。
在重悬液中加入蔗糖,可以为农杆菌提供足够的能量,保证其在转化过程中稳定生存和繁殖,同时也可以增加农杆菌与目标植物细胞之间的亲和性,提高转化效率。
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